細胞培養(yǎng)：細胞凍存

細胞冷凍保存是生物研究工作流程中一個重要組成部分。在低溫下，活細胞中的生物和化學反應會大大減少，這一現(xiàn)象被廣泛用于長期儲存細胞和組織。接下來上海紀寧生物為您介紹：

1、什么是細胞凍存

2、細胞凍存步驟

3、細胞凍存注意事項

什么是細胞凍存？

細胞凍存是利用低溫保存細胞和組織以備將來使用的過程。該技術(shù)涉及將細胞冷卻到極低溫度（-80?C至-196?C）并暫停其細胞代謝，從而無限期地保存細胞。當細胞內(nèi)的水結(jié)冰時，冰的形成會導致溶質(zhì)失衡并破壞細胞結(jié)構(gòu)。通過使用適當?shù)募夹g(shù)和含有適當冷凍保護劑和添加劑的冷凍介質(zhì)，研究人員可以最大限度地提高細胞解凍后的細胞活力，以供細胞培養(yǎng)。

細胞凍存步驟

1.制備細胞凍存液:應根據(jù)細胞類型和實驗需求選擇合適的配方，常用的凍存液配方包括：10%DMSO+90%胎牛血清(FBS)或10%DMSO+90%細胞培養(yǎng)基。凍存液配制好后，應進行過濾除菌或在無菌條件下操作，并分裝保存，避免反復凍融。

2.收集和處理細胞:取形態(tài)良好，處于對數(shù)生長期的細胞，用適宜的消化酶進行消化，待細胞形態(tài)發(fā)生改變并開始脫落時終止消化。將細胞懸液收集至離心管中，以[根據(jù)細胞類型調(diào)整]g離心[根據(jù)細胞類型調(diào)整]分鐘。棄去上清液，用少量預冷的凍存液輕輕重懸細胞，并進行細胞計數(shù)。

3.調(diào)整細胞濃度:根據(jù)細胞數(shù)量和目標細胞濃度，分次加入適量預冷凍存液，輕輕混勻，最終將細胞濃度調(diào)整至1-5×10^6cells/mL。

4.分裝細胞:將調(diào)整好濃度的細胞懸液分裝到已標記好的凍存管中，每管0.5-1mL。

5.凍存:將凍存管放入程序降溫盒或用泡沫等包裹，確保降溫速度為-1℃/分鐘左右，然后放入-80℃冰箱過夜，最后轉(zhuǎn)移至液氮罐中長期保存。