一、直接ELISA

原理：將抗原與固相載體連接，洗滌除去未結合的抗原及雜質。加酶標抗體進行孵育。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。加底物反應。直接法主要用于測定抗原。

優點：操作流程簡短，實驗步驟少；無需使用二抗，避免了交叉反應；實驗步驟少，操作不易出錯。

缺點：實驗中的一抗需要直接用酶標記，成本相對較高。

二、間接法ELISA

原理：將抗原與固相載體相連結，形成固相抗原。洗滌除去未結合的抗原及雜質。加入特異性一抗與固相抗原相結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后，加酶標二抗。固相免疫復合物中的抗體與酶標二抗結合，從而間接地標記上酶。洗滌后，加底物顯色。

優點：酶標二抗可加強信號，提高靈敏度；靈活性更大，同一酶標二抗可應用于多種不同的一抗；不直標一抗，可保留更多的免疫反應性；成本更低，使用標記抗體更少。

缺點：交叉反應幾率升高。