NB16 人神經母細胞瘤細胞
細胞鑒定 ：STR 鑒定已通過
細胞來源 ：國外
細胞背景 ：1990 年建立于 35 個月的神經母細胞瘤（IV 期）日本女性患兒。
細胞特性 ： 形態：淋巴母細胞樣，懸浮生長。
用 途： 僅供科研使用。 培養條件
注意事項
1）準備準備 1640培養基；優質胎牛血清，15%；雙抗，1%。
2）培養條件： 空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為 70%-80%。
一. 消毒靜置等細胞穩定后拍照 100X 和 200X。棄去培養上清，用 PBS 潤洗細胞 1-2 次并吸走。
二. T25 瓶加入 0.25％EDTA 胰蛋白酶 1-2ml 于培養瓶中震蕩混勻，如果屬于貼壁不牢固的細胞很容易脫落的就培養箱外面消化震蕩待脫落 90%以上終止消化，一般小于 1 分鐘以內，甚至不加胰酶有部分貼壁非常不牢固的細胞也會自然震蕩脫落。如果是貼壁牢固的細胞則置于 37℃培養箱中消化提高效率，每 40-50 秒拿出培養箱震蕩幫助細胞脫落，如脫落 90%以上則對應 3-6ml 含有 10%血清的完全培養基終止徹底，以防胰酶殘留損傷細胞。如果貼壁非常牢固的細胞，脫落的比例比較低，也不超過 2 分鐘后終止消化徹底，再加入 1ml 完全培養基讓細胞緩沖后再過 2 分鐘進行二次消化，反復分步消化以降低單次消化時長，減少刺激，保護細胞膜。或采用刮產刮細胞的方式處理也可以。總歸原則是達到消化目的的同時減少細胞膜受到的損傷越小越好。
三. 消化完成后輕輕吹勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。將細胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培養皿中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按 1:2 和以上比例進行，具體以實際細胞密度決定。期間多的細胞一定保存多份細胞凍存管備種。
大多數懸浮細胞對于環境比較敏感，建議一直維持高密度生長，一般情況下細胞密度維持在 1×10 5 到 1×10 6個/mL（不同細胞對密度要求不同）。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中 800-1000rpm，離心 5min，棄去上清，補加 1-2mL 培養液后重懸混勻后將細胞懸液按 1：2 的比例（首次可以 1:1 分瓶）分到新 T25 瓶中，添加5-6ml 按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按 1:2 和以上比例進行。大多數血液類相關的懸浮細胞受運輸影響比較大，會出現一批死細胞，如果因此密度降低了，可以離心后轉移至 T25 瓶中豎著培養，培養基添加 5ml 以提高總體密度，隔一天后觀察密度可以的話再補液 3ml 完全培養基后 T25 瓶放倒，等沉淀穩定后觀察細胞密度，持續添加培養基等密度上升足夠傳代為止。 運輸形式 常溫發貨：收到后 T25 瓶消毒再放置培養箱靜置 2-3 小時后觀察密度和狀態拍照 2-3 張反饋給銷售，密度達標就可以傳代。前期傳代比例 1:2，等再次長滿后傳代時建議凍存其中一整瓶成 1 個 1ml 凍存管，另外一瓶繼續傳代，
反復凍存 2-3 只后才擴增做實驗，以防突發情況引起斷種。
干冰發貨：
常規細胞發貨凍存管 2 只，復蘇 1 只，另外一只備用，第一個復蘇不成功時嚴格按照廠家要求復蘇第二個，均沒有復蘇成功的情況即時留存復蘇照片通知銷售。
1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。
