人支原體PCR試劑盒

品牌：紀寧生物
貨號：JN30755
規格： 50次

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產品詳情

人支原體PCR試劑盒
產品及特點：
支原體（mycoplasma）是 1898 年 Nocard 等發現的一種類似細菌但不具有胞壁的原核微生物，能在無生命的人工培養基上生長繁殖，直徑 50-300nm，能通過細菌濾器。又稱霉形體，為目前發現的最小的最簡單的原核生物，支原體細胞中唯一可見的細胞器是核糖體(支原體是原核細胞，原核細胞的細胞器只有核糖體)。基因組多為雙鏈 DNA，散布于整個細胞內沒有形成的核區或擬核。與泌尿生殖道感染有關的主要是分解尿素支原體和人型支原體兩種，約有20-30%的非淋菌性尿道炎的病人，是由以上兩種支原體引起的，是非淋菌性尿道炎及宮頸炎的第二大致病菌。因此對支原體進行快速靈敏的診斷具有重要的意義。本產品就是為此目的根據 PCR 原理開發的產品，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經過精心優化，專一性強，只擴增人支原體，與其他病原沒有交叉反應。
3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。
規格及成分：

編號	成分	規格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃色）
試劑三	人支原體 PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	人支原體 PCR 陽性對照（1×10E8 /μL）	50 μL（黃蓋）
試劑五	使用手冊	1 份

運輸及保存：
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。
自備試劑：
樣品DNA。
自備試劑：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 人支原體 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設置 PCR 反應（40μL 體系）：
3. 對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設置N+4個反應。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：

成份	N+2 個樣品管	PCR 陰性對照	PCR陽性對照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
人支原體PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2個樣品DNA模板	各18μL	--	--
PCR 陰性對照（水）	--	18μL	--
PCR 陽性對照（人支原體PCR陽性對照1000倍稀釋液）	--	--	18μL

4. 按下表設置 PCR 反應：

過程	溫度	時間
預變性	95℃	5 min
PCR 反應35個循環	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測：
5. 取 10-20 μL PCR 產物。電泳檢測 PCR 產物。本產品提供的 PCR Mix 在擴增結束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產物陽性對照必須有 551bp 大小的條帶出現，陰性對照必須無任何擴增，否則實驗無效。對沒有擴增產物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。

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人支原體PCR試劑盒

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